1、黃曲霉，半知菌類，一種常見腐生真菌。多見于發(fā)霉的糧食、糧制品及其它霉腐的有機(jī)物上。菌落生長(zhǎng)較快，結(jié)構(gòu)疏松，表面灰綠色，背面無(wú)色或略呈褐色。菌體有許多復(fù)雜的分枝菌絲構(gòu)成。

(資料圖片僅供參考)

2、黃曲霉毒素有非常高的肝毒性、肝致腫瘤性、致畸和致突變性，可在采前、采中和采后的各種環(huán)境下侵染多種重要農(nóng)產(chǎn)品，例如花生、玉米、水稻和棉籽。自然界中黃曲霉毒素的產(chǎn)生取決于多種因素，例如碳、氮、溫度、水分活度、pH值、發(fā)育階段、氧化脅迫、植物代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素可引起多種疾病，但是可以通過阻斷和干擾吸收及干擾代謝酶來(lái)調(diào)節(jié)體內(nèi)的黃曲霉毒素。

黃曲霉

Aspergillus flavus

黃曲菌、黃曲霉、黃曲霉與黃曲霉

真菌界

子囊菌門

盤菌亞門

散囊菌綱

散囊菌亞綱

散囊菌目

發(fā)菌科

曲霉屬

黃曲霉菌

15、1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織（WHO)的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為1類致癌物，是一種毒性極強(qiáng)的劇毒物質(zhì)。黃曲霉毒素的危害性在于對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時(shí)，可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黃曲霉毒素b1最為多見。其毒性和致癌性也最強(qiáng)。

16、上世紀(jì)60年代，在英國(guó)發(fā)生的十萬(wàn)只火雞突發(fā)性死亡事件被確認(rèn)與從巴西進(jìn)口的花生粕有關(guān)。進(jìn)一步的調(diào)研證明，這些花生粕被一種來(lái)自真菌的有毒物質(zhì)污染，這些研究工作最終使人們發(fā)現(xiàn)了黃曲霉（aspergillus。flavus)產(chǎn)生的有毒代謝物質(zhì)，黃曲霉毒素（aflatoxins)是黃曲霉和寄生曲霉的代謝產(chǎn)物，特曲霉也能產(chǎn)生黃曲霉毒素，但產(chǎn)量較少。產(chǎn)生的黃曲霉毒素主要有b1，b2，g1，g2以及另外兩種代謝產(chǎn)物m1，m2。其中m1和m2是從牛奶中分離出來(lái)的。b1，b2，g1，g2，m1和m2的在分子結(jié)構(gòu)上十分接近。

17、黃曲霉的有些菌系能產(chǎn)生黃曲霉毒素，不僅能引起禽畜中毒致死，亦有致癌作用。

18、黃曲霉毒素（aflatoxins)，是一組化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物，已分離鑒定出12種，包括b1，b2，g1，g2，m1，m2，p1，q，h1，gm，b2a和毒醇。黃曲霉毒素的的基本結(jié)構(gòu)為二呋喃環(huán)和香豆素，b1是二氫呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌?。即含有一個(gè)雙呋喃環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰?fù)ㄏ愣顾兀?。前者為基本毒性結(jié)構(gòu)，后者與致癌有關(guān)。m1是黃曲霉毒素b1在體內(nèi)經(jīng)過羥化而衍生成的代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素的主要分子型式含b1，b2，g1，g2，m1，m2等。其中m1和m2主要存在于牛奶中。b1為毒性及致癌性最強(qiáng)的物質(zhì)。

19、在紫外線下，黃曲霉毒素b1，b2發(fā)藍(lán)色熒光，黃曲霉毒素g1，g2發(fā)綠色熒光。黃曲霉毒素的相對(duì)分子量為312-346。難溶于水，易溶于油，甲醇，丙酮和氯仿等有機(jī)溶劑，但不溶于石油醚，己烷和乙醚中。一般在中性溶液中較穩(wěn)定，但在強(qiáng)酸性溶液中稍有分解，在ph9-10的強(qiáng)堿溶液中分解迅速。其純品為無(wú)色結(jié)晶，耐高溫，黃曲霉毒素b1的分解溫度為268℃紫外線對(duì)低濃度黃曲霉毒素有一定的破壞性。

20、黃曲霉毒素存在于土壤，動(dòng)植物，各種堅(jiān)果，特別是花生和核桃中。在玉米，通心粉，調(diào)味品牛奶，奶制品，食用油等制品中也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素。一般在熱帶和亞熱帶地區(qū)，食品中黃曲霉毒素的檢出率比較高，在中國(guó)，產(chǎn)生黃曲霉毒素的產(chǎn)毒菌種主要為黃曲霉，1980年測(cè)定了從17個(gè)省糧食中分離的黃曲霉1660株，廣西地區(qū)的產(chǎn)毒黃曲霉最多，檢出率為58%?？偟姆植记闆r為：華中，華南，華北產(chǎn)毒株多，產(chǎn)毒量也大，東北，西北地區(qū)較少。

21、黃曲霉毒素對(duì)人和動(dòng)物健康的危害均與黃曲霉毒素抑制蛋白質(zhì)的合成有關(guān)。黃曲霉毒素分子中的雙呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)，是產(chǎn)生毒性的重要結(jié)構(gòu)。研究表明，黃曲霉毒素的細(xì)胞毒作用，是干擾信息rna和dna的合成，進(jìn)而干擾細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，導(dǎo)致動(dòng)物全身性損害（nibbelink，1988)。黃光琪等（1993)研究指出，黃曲霉毒素b1能與trna結(jié)合形成加成物，黃曲霉毒素-trna加成物能抑制trna與某些氨基酸結(jié)合的活性，對(duì)蛋白質(zhì)生物合成中的必需氨基酸，如賴氨酸，亮氨酸，精氨酸和甘氨酸與trna的結(jié)合，均有不同的抑制作用，從而在翻譯水平上干擾了蛋白質(zhì)生物合成，影響細(xì)胞代謝。。

22、黃曲霉毒素中毒(aflatoxicosis)主要對(duì)動(dòng)物肝臟的傷害，受傷害的個(gè)體因動(dòng)物種類，年齡，性別和營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)而異。研究結(jié)果表明，黃曲霉毒素可導(dǎo)致肝功能下降，降低牛奶產(chǎn)量和產(chǎn)蛋率。并使動(dòng)物的免疫力降低，易受有害微生物的感染。此外，長(zhǎng)期食用含低濃度黃曲霉毒素的飼料也可導(dǎo)致胚胎內(nèi)中毒。通常年幼的動(dòng)物對(duì)黃曲霉毒素更敏感。黃曲霉毒素的臨床表現(xiàn)為消化系統(tǒng)功能紊亂，降低生育能力。降低飼料利用率，貧血等。黃曲霉毒素不僅能夠使奶牛的產(chǎn)奶量下降，而且還使牛奶中含有轉(zhuǎn)型的黃曲霉毒素m1和m2。據(jù)美國(guó)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)家統(tǒng)計(jì)，由于食用黃曲霉毒素污染的飼料，每年至少要使美國(guó)畜牧業(yè)遭受10%的經(jīng)濟(jì)損失。在中國(guó)，由此而帶來(lái)的畜牧業(yè)損失可能會(huì)更大。

23、人類健康受黃曲霉毒素的危害主要是由于人們食用被黃曲霉毒素污染的食物。對(duì)于這一污染的預(yù)防是非常困難的，其原因是由于真菌在食物或食品原料中的存在是很普遍的。國(guó)家衛(wèi)生部門禁止企業(yè)使用被嚴(yán)重污染的糧食進(jìn)行食品加工生產(chǎn)，并制定相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)督企業(yè)執(zhí)行。

24、但對(duì)于含黃曲霉毒素濃度較低的糧食和食品無(wú)法進(jìn)行控制。在發(fā)展中國(guó)家，食用被黃曲霉毒素污染的食物與癌癥的發(fā)病率呈正相關(guān)性。亞洲和非洲的疾病研究機(jī)構(gòu)的研究工作表明，食物中黃曲霉毒素與肝細(xì)胞癌變呈正相關(guān)性。長(zhǎng)時(shí)間食用含低濃度黃曲霉毒素的食物被認(rèn)為是導(dǎo)致肝癌，胃癌，腸癌等疾病的主要原因。1988年國(guó)際腫瘤研究機(jī)構(gòu)將黃曲霉毒素b1列為人類致癌物。除此以外，黃曲霉毒素與其它致病因素（如肝炎病毒）等對(duì)人類疾病的誘發(fā)具有疊加效應(yīng)。

25、黃曲霉毒素b1的半數(shù)致死量為0。36毫克/公斤體重，屬特劇毒的毒物范圍（動(dòng)物半數(shù)致死量<10毫克/公斤=它的毒性比氰化鉀大10倍，比砒霜大68倍）。它引起人的中毒主要是損害肝臟，發(fā)生肝炎，肝硬化，肝壞死等。臨床表現(xiàn)有胃部不適，食欲減退，惡心，嘔吐，腹脹及肝區(qū)觸痛等；嚴(yán)重者出現(xiàn)水腫，昏迷，以至抽搐而死。黃曲霉毒素是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的致癌物質(zhì)。其致癌力是奶油黃的900倍，比二甲基亞硝胺誘發(fā)肝癌的能力大75倍，比3，4苯并芘大4000倍。它主要誘使動(dòng)物發(fā)生肝癌，也能誘發(fā)胃癌，腎癌，直腸癌及乳腺，卵巢，小腸等部位的癌癥。

26、1995年，世界衛(wèi)生組織制定的食品黃曲霉毒素最高允許濃度為15ug/kg。

27、美國(guó)聯(lián)邦政府有關(guān)法律規(guī)定人類消費(fèi)食品和奶牛飼料中的黃曲霉毒含量（指b1+b2+g1+g2的總量）不能超過15ug/kg。人類消費(fèi)的牛奶中的含量不能超過0。5ug/kg，其他動(dòng)物飼料中的含量不能300ug/kg。

28、而歐盟國(guó)家規(guī)定更加嚴(yán)格，要求人類生活消費(fèi)品中的黃曲霉毒素b1的含量不能超過0。05ug/kg。

29、薄層層析（thin-layerchromatography，tlc)是在黃曲霉毒素研究方面應(yīng)用最廣的分離技術(shù)。自1990年，它被列為aoac(associationofofficialagriculturalchemists)標(biāo)準(zhǔn)方法，該方法同時(shí)具有定性和定量分析黃曲霉毒素的功能。

30、液相色譜（liquidchromatography，lc)與薄層層析在許多方面具有相似性，二者互相補(bǔ)充。通常用tlc進(jìn)行前期的條件設(shè)定，選擇適宜的分離條件后，再用lc進(jìn)行黃曲霉毒素的定量測(cè)定。

31、利用具有高度專一性的單克隆抗體或多克隆抗體設(shè)計(jì)的黃曲霉毒素的免疫分析方法，也是最常用的黃曲霉毒素檢測(cè)方法。這類方法通常包括放射免疫分析方法（radioimmunoassay，ria)，酶聯(lián)免疫法（enzyme-linkedofimmunosorbentassay，elisa)和免疫層析法（immunoaflinitycolumnassay，ica)。它們均可以對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行定量測(cè)定。

32、(1)免疫親和柱-熒光分光光度法和免疫親和術(shù)-hplc法

33、免疫親和柱法和酶聯(lián)免疫吸附法雖然都可達(dá)到速簡(jiǎn)便效果，但酶聯(lián)免疫吸附法僅能檢測(cè)單一毒素（如黃曲霉毒素b1)含量，而且易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，難以控制。免疫親和柱法（包括熒光光度法和hplc法）卻能達(dá)到既定量準(zhǔn)確又快速簡(jiǎn)便的要求。

34、免疫親和柱的使用可以避免傳統(tǒng)tlc和hplc的缺點(diǎn)，同時(shí)免疫親和柱與tlc和hplc法結(jié)合可以大大提高工作效率，提高靈敏度和準(zhǔn)確度。

35、黃曲霉毒素免疫親和柱-熒光光度計(jì)法是以單克隆免疫親和柱為分離手段，用熒光計(jì)，紫外燈作為檢測(cè)工具的快速分析方法。它克服了tlc和hplc法在操作過程中使用劇毒的真菌毒素作為標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物和在樣品預(yù)處理過程中使用多種有毒，異味的有機(jī)溶劑，毒害操作人員和污染環(huán)境的缺點(diǎn)。

36、同時(shí)黃曲霉毒素免疫親和柱-熒光光度計(jì)法分析速度快，一個(gè)樣品只需10-15min，比傳統(tǒng)方法快幾個(gè)小時(shí)甚至幾天時(shí)間；儀器設(shè)備輕便容易攜帶，自動(dòng)化程度高，操作簡(jiǎn)單，直接讀出測(cè)試結(jié)果，可以在小型實(shí)驗(yàn)或現(xiàn)場(chǎng)使用?？梢赃M(jìn)行黃曲霉毒素總量(b1b2g1g2)的測(cè)定，檢測(cè)限可達(dá)到1ug/kg，達(dá)到黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)限量值以下測(cè)定范圍為1-300ug/kg。

37、黃曲霉毒素免疫親和柱-高效液相色譜法比傳統(tǒng)的hplc法更加安全，可靠，靈敏度和準(zhǔn)確度高。它采用單克隆抗體免疫技術(shù)，可以特效性地將黃曲霉毒素或其他真菌毒素分離出來(lái)，分離效率和回收率高。

38、分析原理試樣中的黃曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液經(jīng)過過濾，稀釋后，用免疫親和柱凈化，以甲醇將親和柱上的黃曲霉毒素淋洗下來(lái)，在淋洗液中加入溴溶液衍生，以提高測(cè)定靈敏度，然后用熒光分光光度計(jì)進(jìn)行定量。也可以將甲醇-黃曲霉毒素淋洗液的一部分注入hplc中，對(duì)黃曲霉毒素b1，b2，g1，b2分別進(jìn)行定量分析。免疫親和柱是用大劑量的黃曲霉毒素單克隆抗體固化在水不溶性的載體上，然后裝柱而成。該方法的測(cè)定范圍0-300ug/kg。

39、(2)酶聯(lián)免疫吸附法

40、1996年，nakane建立了辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體的測(cè)定技術(shù)。由于該方法簡(jiǎn)便，敏感，特異，可作為多種抗原或抗體的測(cè)定，20世紀(jì)70年代后期，該方法引入真菌毒素的檢測(cè)中，下面介紹的是競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附間接法檢測(cè)黃曲霉毒素b1。

41、原理：將已知抗原吸附在固態(tài)載體表面，洗除末吸附抗原，加入一定量抗體與待測(cè)樣品（含有抗原）提取液的混合液，競(jìng)爭(zhēng)培養(yǎng)后，在固相載體表面形成抗原抗體復(fù)合物。洗除多余抗體成分，然后加入酶標(biāo)記的抗球蛋白的第二抗體結(jié)合物，與吸附在固體表面的抗原抗體結(jié)合物相結(jié)合，再加入酶底物。在酶的催化作用下，底物發(fā)生降解反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)，通過酶標(biāo)檢測(cè)儀測(cè)出酶底物的降解量，從而推知被測(cè)樣品中的抗原量。

42、(3)微柱篩選法可以用來(lái)半定量測(cè)定各種食品中黃曲霉毒素b1，b2，g1，g2的總量

43、原理：樣品提取液中的黃曲霉毒素被微柱管風(fēng)硅鎂型吸附層吸附后，在波長(zhǎng)365nm紫外光燈下顯示藍(lán)紫色熒光環(huán)，其熒光強(qiáng)度與黃曲霉毒素在一定的光密度范圍內(nèi)成正比例關(guān)系。若硅鎂型吸附劑層未出現(xiàn)藍(lán)紫色熒光，則樣品為陰性（方法靈敏度為5-10ug/kg)。由于在微柱上不能分離黃曲霉毒素b1，b2，g1，g2，所以測(cè)得結(jié)果為總的黃曲霉毒素含量。

44、(4)一步式黃曲霉毒素檢測(cè)金標(biāo)試紙法

45、一步式黃曲霉毒素檢測(cè)金標(biāo)試紙法是利用單克隆抗體而設(shè)計(jì)的固相免疫分析法。由此產(chǎn)生的一步式黃曲霉毒素快速檢測(cè)試紙可在5—10分鐘完成對(duì)樣品中黃曲霉毒素的定性測(cè)定。借助黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)樣品，這種方法能估算黃曲霉毒素的含量，非常適用于現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試和進(jìn)行大量樣品的初選。

46、薄膜層析法和液相色譜法是目前國(guó)內(nèi)絕大多數(shù)檢測(cè)機(jī)構(gòu)都在使用的方法，由于其檢測(cè)周期長(zhǎng)，程序復(fù)雜，所需試劑繁多等缺點(diǎn)已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)代檢測(cè)要求。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，特別是免疫學(xué)，生物化學(xué)，分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，人們已創(chuàng)建了不少快速，簡(jiǎn)便，特異，敏感，低耗且適用的黃曲霉毒素檢測(cè)方法。而且以金標(biāo)試紙為代表的這些方法已經(jīng)被先進(jìn)國(guó)家所廣泛使用，引進(jìn)和消化這些先進(jìn)的方法是我們檢測(cè)領(lǐng)域的當(dāng)務(wù)之急。免疫親和柱法優(yōu)點(diǎn)很多，但由于檢測(cè)費(fèi)用過高，而無(wú)法普及。而一步式黃曲霉毒素檢測(cè)金標(biāo)試紙法似乎更適用于中國(guó)，值得推廣。

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